平喘合剂抑制哮喘模型大鼠气道 
1 材料与方法
1.1 动物选择 健康雄性Wistar大鼠40只，体重（200±10）g，由山东大学实验动物中心提供，符合一级实验动物标准。
1.2 药物配制
1.2.1 平喘合剂药物组成 炙麻黄、炒杏仁、细辛、清半夏、炒苏子、川芎、炒地龙、黄芩、沉香、甘草等，由山东中医药大学附属医院中药制剂室按正交试验法筛选工艺，以最佳流程制备，每毫升药液含生药约1g，浓缩成1.27g/ml的浓度，250ml/瓶。
1.2.2 博利康尼 用生理盐水配成0.083mg/ml的浓度。
1.2.3 京制咳嗽痰喘丸 用生理盐水配成0.14g/ml的浓度。
1.3 药品与试剂 液体石蜡，天津市新精细化工开发中心（批号：980908）。羊毛脂，中国嘉定华亭羊毛脂厂（批号：990403）。冻干卡介苗制剂60mg/支，兰州生物制品研究所（批号：20010610）。卵清蛋白（OA）冻干粉10g/支，北京鼎国生物技术发展中心，Sigma分装（批号：20011222）。TNF-α、IL-2、IL-4试剂盒（ELISA），深圳晶美公司。ET-1试剂盒（放射免疫），购于北京东亚放免所。
1.4 动物造模与分组 取体重为（200±10)g的雄性Wistar大鼠40只，随机分为5组，A：正常组，B：模型组，C：博利康尼组，D：痰喘丸组，E：平喘合剂组，每组8只（经统计学处理，组间体重差异无显著性）。除正常组外，余4组进行造模，方法如下：抗原液的制备参考林清华主编的《免疫学实验》，并根据以往经验稍做改进［1，2］。称取5g优质羊毛脂置研钵中，逐滴加入液体石蜡油40ml，水浴混匀，装入小磨口瓶内，高压（0.14mPa）蒸汽灭菌20min，冷却后倒入无菌研钵中，按每毫升加入50mg卵清蛋白、10mg卡介苗，慢慢研磨，制成乳白色混悬液作为抗原液备用。取1ml抗原液于大鼠背部选4个点进行皮下注射，正常组则以等量生理盐水代替。抗原接种后休息5天，从第6天开始卵清蛋白雾化吸入激发，至引喘成功。
1.5 实验方法
1.5.1 给药方法 将造模成功后的大鼠进行药物灌胃，药物用量按陈奇提供的常用动物与人的药量换算公式计算（D2=D1·R2/R1）［3］。C、D、E组均每次给予相应的药物（0.5ml/100g体重），每日2次，A、B组以等量的生理盐水代替，共喂养7天。
1.5.2 取材 激发试验后24h用0.4%戊巴比妥钠麻醉（1ml/100g体重）大鼠，腹主动脉取血，EDTA-2Na（乙二胺四乙酸二钠）抗凝，以3000r/min离心5min，取血浆代用。取血后处死动物，结扎左主支气管，用气管套管插在主支气管上，结扎固定，行右支气管肺泡灌洗。针管内抽6ml生理盐水，缓慢推进，保留20s，然后缓慢抽回，共操作3次，收集肺泡灌洗液（BALF）4ml。以3000r/min离心5min，取上清液待用。
1.6 观察项目
1.6.1 引喘潜伏期 实验第13天将致敏大鼠放在玻璃钟罩内，用1%的卵清蛋白生理盐水以5ml/min的流速进行喷雾，每次喷20min，观察至喷雾停止后10min，记录大鼠出现喘息的情况（表现为四肢挠抓，躁动不安，伴有呼吸加速，腹部内陷起伏等呼吸困难症状）。正常组以生理盐水代替。
1.6.2 血浆及BALF中TNF-α、IL-2、IL-4的含量测定 取抗凝血以3000r/min离心5min，取血浆待用。采用ELISA法测血浆及BALF中TNF-α、IL-2、IL-4的含量。（具体步骤按试剂说明进行操作）。
1.6.3 血浆及BALF中ET-1的含量测定 用放射免疫法测血浆及BALF中ET-1的含量（具体步骤按试剂说明进行操作）。
1.6.4 肺组织EOS凋亡检测 肺组织经常规固定（中性甲醛）、脱水、切片至水化，TUNEL法用地高辛介导过氧化物酶联显色，细胞核有黄色颗粒者为阳性细胞。在高倍视野下随机选择5个视野，计总细胞数和凋亡细胞数，根据以下公式计算细胞凋亡率。凋亡细胞阳性率（%）=凋亡细胞数/总细胞数×100%。
2 实验结果
2.1 平喘合剂对哮喘模型大鼠引喘潜伏期的影响 正常大鼠引喘不敏感，没有明显的喘息表现，仅有短暂的呼吸增快，很快恢复正常。引喘时出现，说明造模成功。引喘时出现四肢挠抓，躁动不安，伴有呼吸加速，腹部内陷起伏等呼吸困难症状时，作为哮喘模型大鼠的引喘潜伏期。见表1。
表1 平喘合剂对哮喘模型大鼠引喘潜伏期的影响 （x±s）
注：与B组比较，△P＜0.05；与C组比较，*P＜0.05；与D组比较，▲P＜0.05
2.2 平喘合剂对哮喘模型大鼠血浆和BALF中IL-2、IL-4、TNF-α、ET-1含量的影响 见表2。
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